免疫共沉淀实验流程
来源于:上海安博官方网站科技有限公司,浙江安博官方网站科技有限公司 | 发布时间:2024/4/12 17:13:00
通过免疫共沉淀确定未知结合蛋白
该实验的思路为:先通过免疫共沉淀实验,得到结合蛋白,随后对得到的结合蛋白进行测序。
用磷酸盐缓冲液洗30块10 cm培养板上的适宜细胞。刮去每块板上的细胞到1 ml冰冷的EBC裂解缓冲液中;
将每毫升细胞悬液转移到微量离心管中,在微量离心机上4℃以最大速度离心15min;
收集上清(约30 ml)并加入30 μg的适当抗体,4℃摇动免疫沉淀物1 h;
加入0.9 ml的琼脂糖蛋白A悬液,4℃摇动免疫沉淀物30 min;
用含900 mmol/L NaCl的NETN洗琼脂糖蛋白A混合物,再重复洗5次。最后,用NETN洗一次;
吸出混合物的液体部分。加入800 μl的1×SDS胶加样缓冲液到球珠中,煮沸4min;
将样品加入到大孔的不连续SDS-PAGE梯度胶中,在10mA的恒定电流下电泳过夜;
通过考马斯亮蓝染色观察蛋白质泳带;
从胶上切下目标带,将其放到微量离心管中,用1ml 50%乙腈洗两次,每次3 min;
用胰蛋白酶消化胶中的蛋白质,再进行电洗脱;
通过窄孔高效液相色谱分离肽。将收集的肽进行Edman降解测序。
*以上内容来自网络
相关免疫学技术
-
2024-09-27
-
2024-09-26
-
2024-09-25
-
2024-09-24
-
2024-09-23
热门文章
- ▪ 端午放心吃!粽子抽检全都合格
- ▪ 安博官方网站:美媒:孩子最可能11岁时尝试大麻!
- ▪ ELISA试剂盒组成与常见ELISA试剂盒分类
- ▪ 安博官方网站:烧烤食物吃多了会患癌嘛?
- ▪ ELISA操作要点:ELISA实验18条通用规则
- ▪ 安博官方网站:股神”巴菲特确认收购医疗责任承保公司
- ▪ ELISA试剂盒免费代测服务
- ▪ 安博官方网站:秋天我们为什么会莫名其妙心情不好?
- ▪ 《Science stars of China》共选出十位中国科学之星!
- ▪ 安博官方网站:美国总统奥巴马计划以后投资“生物医学”领域
- ▪ 安博官方网站:“超级细菌”的耐药性基因可遗传是真的吗?
- ▪ 安博官方网站:小鼠是如何做到活到140岁的
- ▪ 安博官方网站:洗衣机影响人类生殖力下降吗?